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PCR檢測試劑盒樣本如何處理

更新時間:2024-07-16      瀏覽次數(shù):977

PCR檢測試劑盒的樣本處理涉及幾個關(guān)鍵步驟,具體取決于所使用的試劑盒類型和待檢測的樣本。以下是一些典型的步驟和注意事項:


樣本處理(樣本處理區(qū))過程:

1、先對痰液樣本進行目測,若樣本中唾液占大部分,則需重新采集樣本

2、目測合格后,在樣本中加入2~3倍體積4%的NaOH溶液,<采?,?50rpm、37℃條件下處理30min或常溫下1Hr,使其充分液化(無明顯固狀物并且吸出時無拖絲現(xiàn)象即為液化*;若液化不*,可適當再加入少量4%的NaOH溶液直至液化*)。

3、取液化后的樣本900ul以及試劑盒中的陰性對照、強陽性對照和臨陽性對照各500ul于1.5ml無菌離心管中,13,000rpm離心10min。

4、棄上清(先倒出大部分液體,再用移液器盡量吸干至無明顯液滴為止),沉淀中加入1ml滅菌生理鹽水,大豆RR PCR檢測試劑盒振蕩懸?。ㄗ⒁猓喊淳o離心管蓋后,橫向按在旋渦振蕩器上將沉淀振起),13,000rpm離心10min。

5、棄上清,用1ml滅菌生理鹽水洗滌沉淀,13,000rpm離心10min。

6、棄上清,向沉淀中加入DNA提取液30ul,振蕩混勻,2,000rpm離心5sec,放37℃溫浴30min,再放入100℃水浴/干浴10min,13,000rpm離心10min,保留上清備用。(如果樣本裂解產(chǎn)物當天不使用,請于-20℃保存。)


支原體PCR檢測:這種試劑盒用于檢測細胞培養(yǎng)物和其他生物基質(zhì)中的支原體。樣本預處理包括從細胞培養(yǎng)液中取100µl上清至1.5 ml反應管中,然后在95℃下孵育10分鐘,接著以最大轉(zhuǎn)速離心15秒。之后,可以直接使用2µl進行PCR,或者在特定溫度下保存樣本長達6天1。


血液樣本的直接PCR:這種試劑盒允許直接對全血樣本進行PCR擴增,無需進行DNA純化或樣本預處理。它兼容含EDTA、肝素、檸檬酸鹽等常規(guī)抗凝劑的新鮮血液、冷藏(凍)血液及商用干xue漬。試劑盒中的DNA Polymerase組合具有高保真性和對PCR抑制劑的高耐受性2。


熒光定量PCR:熒光定量PCR(Real-time PCR)是一種在標準PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的方法,用于定量樣本中的DNA或RNA。它通過在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,實現(xiàn)擴增反應中每個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測,從而進行定量分析3。


RT-PCR方法檢測xin冠病毒:在RT-PCR檢測中,通常包括RNA提取、RT反應和PCR反應三個環(huán)節(jié)。質(zhì)控品的使用對于試劑盒生產(chǎn)過程中的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制至關(guān)重要。例如,模擬病毒質(zhì)控品可用于樣本采集、保存、轉(zhuǎn)運和RNA提取及其后續(xù)實驗操作等過程的質(zhì)量控制4。


這些步驟展示了PCR檢測試劑盒樣本處理的多樣性和復雜性。具體操作需要根據(jù)試劑盒說明書和實驗要求進行。



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