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豬大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)ELISA試劑盒說明書

更新時間:2023-07-06      瀏覽次數(shù):484

使用目的:

本試劑盒用于測定豬血清血漿及相關液體樣本中大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)的存在與否。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

陽性對照

0.5ml×1瓶

3

標包被

12孔×8條

9

陰性對照

0.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。


1. 洗滌:操作同5。

2. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

3. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

4. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算和結(jié)果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)陰性

陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為大腸桿菌病F型特異性抗體IgY(E.coli-F sIgY)陽性。

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月




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