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ELISA實驗結果為什么有時候會復測?

更新時間:2023-03-15      瀏覽次數:598

ELISA實驗過程中時常會出現復測現象即我們時常說的"花板"現象,這種現象影響檢驗結果的正確判讀,對工作造成一定的不利影響,一旦出現“花板",實驗結果必須放棄,重新進行,不僅浪費物料和時間,而且還會出現樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。

 

影響因素分析如下:

 

一、標本因素

 

正確處理標本,防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭,防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測,但血清的分離應在抽血后等血液wan全凝固后再離心。

 

二、試劑因素

 

正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時間較長均影響實驗結果的準確性。選擇試劑時應選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好,批間差小的試劑。不同廠家的試劑不能混用,包括底物和洗滌液。檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時,洗滌液應現用現配,同時觀察濃縮洗滌液中有無結晶,若有結晶應放37℃水浴中融化后才可使用。

 

三、技術人員操作因素

 

嚴格按照相關實驗SOP操作實驗。加樣時應盡可能的垂直加樣,并加在包被孔的底部(注:勿應用力過度破壞底部包被物質),不可加在孔的上部及外部。

 

四、溫浴的因素

 

使用水浴箱作為溫浴設備時,應注意水的深淺對結果的影響,當水浴箱中水的的實測溫度37℃時,則水面溫度可能只有34℃,空氣溫度更低,甚至只有二十多度,所以當水浴箱中水位過低時則酶標微孔板沒有浸入水中,則反應溫度會達不到37℃,相應的就會影響酶促反應。為防止邊緣效應,酶標板應盡量浸入水中,以保證受熱的均勻。水浴時,酶標板應封好,以免水滴滴入包被孔中,或陽性標本的蒸發(fā)。嚴格掌握溫浴時間,不可為了早點出結果擅自縮短溫浴時間。

 

五、洗板機的因素

 

廢液瓶裝滿后應及時清空,以防止廢液回流對管道的污染,而使洗滌不che底,造成“花板"。洗板結束后應用蒸餾水che底清洗管道,以防止廢液在管道中的殘留。同時應根據儀器維護保養(yǎng)程序,定期對洗板機進行維護保養(yǎng)。

 

六、酶標儀

 

酶標儀應安置在避光條件下,比色前應提前15-30分鐘開機預熱,這樣測定結果會更穩(wěn)定。為防止顯色的加深或減弱,顯色時間完成后應立即滴加終止液(避免氣泡產生),并在10分鐘內完成比色。酶標板從水浴箱取出后應擦凈孔底水滴,若有水滴或紙屑殘留在孔底,會造成酶標儀讀數錯誤,誤判定為“花板"。



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