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熒光定量PCR試劑盒的操作步驟,快來(lái)學(xué)習(xí)下吧

更新時(shí)間:2023-02-23      瀏覽次數(shù):870
 熒光定量PCR試劑盒的操作步驟:
 
  1、取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
 
  2、兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。
 
  3、RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
 
  4、RNA清洗移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
 
  5、RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
 
  6、溶解RNA沉淀溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。


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